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產品詳情
操作說明
注意事項
產品簡介
本產品SDS-PAGE凝膠制備試劑盒包含凝膠制備所需的所有試劑，用戶只需準備少量純水及制膠設備（制膠底座、玻璃板、梳子等），根據說明書操作即可制得所需凝膠。本試劑盒可制備常規(guī)大小凝膠至少50塊。
儲存與運輸
冰袋（wet ice）運輸；4℃避光保存，有效期12個月。
使用方法
1. 根據目的蛋白分子量和所選電泳緩沖液不同，選擇合適濃度的SDS-PAGE下層膠，參照表格如下：
|
SDS-PAGE分離膠濃度 |
最佳分離范圍（kDa） （Tris-Glycine電泳緩沖液） |
最佳分離范圍（kDa） （SWE快速高分辨電泳緩沖液） |
|
6% |
50-300 |
15-300 |
|
8% |
30-130 |
10-250 |
|
10% |
20-100 |
5-150 |
|
12% |
10-60 |
3-100 |
|
15% |
<40 |
<60 |
2. 根據目標蛋白分子量大小，選取分離膠的濃度，以常用規(guī)格8.3 cm×7.3 cm凝膠板（單塊）為例，可參考下表配制制膠液：
| 分離膠濃度(%) | 6% | 8% | 10% | 12% | 15% | ||||||||||
| 玻璃板厚度 | 0.75 mm | 1.0 mm | 1.5 mm | 0.75 mm | 1.0 mm | 1.5 mm | 0.75 mm | 1.0 mm | 1.5 mm | 0.75 mm | 1.0 mm | 1.5 mm | 0.75 mm | 1.0 mm | 1.5 mm |
| 所需制膠液總體積*（mL） | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 |
| H2O（mL） | 2.12 | 3.18 | 4.24 | 1.85 | 2.78 | 3.7 | 1.59 | 2.38 | 3.17 | 1.32 | 1.98 | 2.64 | 0.92 | 1.38 | 1.84 |
| 30% 丙烯酰胺（29:1）（mL） | 0.8 | 1.2 | 1.6 | 1.07 | 1.6 | 2.14 | 1.33 | 2.0 | 2.67 | 1.6 | 2.4 | 3.2 | 2.0 | 3.0 | 4.0 |
| 1.5 M Tris-HCl（pH 8.8）（mL） | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 | 1.5 | 2.0 |
| 10% SDS（μL） | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 |
| 10% AP（過硫酸銨）μL | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 |
| TEMED（μL） | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 |
*制膠液總體積不包含TEMED的體積。
3. 濃縮膠配制可參考下表：
|
濃縮膠濃度(%) |
5% |
|||
|
H2O（mL） |
1.93 |
2.95 |
3.86 |
5.79 |
|
30% 丙烯酰胺（29:1）（mL） |
0.5 |
0.75 |
1.0 |
1.5 |
|
1.0M Tris-HCl（pH 6.8）（mL） |
0.5 |
0.75 |
1.0 |
1.5 |
|
10% SDS（μL） |
40 |
60 |
80 |
120 |
|
10% AP（過硫酸銨）（μL） |
30 |
45 |
60 |
90 |
|
TEMED（μL） |
4 |
6 |
8 |
12 |
|
總體積*（mL） |
3 |
4.5 |
6.0 |
9.0 |
*總體積不包含TEMED的體積。
4. 推薦電泳條件：
a. 使用SWE快速高分辨電泳緩沖液進行電泳：200-250 V恒壓，25-35 min可完成電泳；
b. 使用Tris-Glycine電泳緩沖液進行電泳：上層膠設置電壓90 V，電泳約30 min（marker進入分離膠）；下層膠調整電壓為150-180 V，約60-90 min(可根據實際情況調整)。
注意事項
1. 所有試劑使用前需要提前復溫至室溫后方可使用。
2. AP（過硫酸銨）用純水配制成10%濃度，即每支180 mg AP（過硫酸銨）管中加入1800 μL純水溶解。配制成溶液的AP建議分裝成小份后-20℃保存，有效期3個月；如放4℃保存，有效期1周。
3. 小于10 kDa的蛋白分離建議使用Tricine膠，丙烯酰胺凝膠可能不足以分離。
4. 溫度對于膠的凝固時間會有影響，一般溫度越低，凝固時間越長；溫度越高凝膠越快。
5. 凝膠需要充分的凝固時間，建議膠制好充分靜置確保凝膠徹底。
6. 當溫度較低時，10%SDS溶液有結晶析出，于37℃復溫融化后可繼續(xù)使用。
7. 如需快速制膠試劑，可購買本公司其他產品，如SDS-PAGE凝膠快速制備試劑盒，或超快速彩色凝膠配制試劑盒系列，及高分辨超快速彩色凝膠配制試劑盒系列，可滿足不同實驗需求。
8. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
本產品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
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