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產(chǎn)品詳情
操作說明
注意事項
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品是適用于大鼠和小鼠外周血淋巴細胞分離的梯度密度分離液，其原理主要是根據(jù)外周血不同細胞之間的密度差異（紅細胞和粒細胞密度大約為1.090 g/mL；血小板密度1.030-1.035 g/mL；淋巴細胞和單核細胞密度1.075-1.090 g/mL），通過梯度密度離心，將淋巴細胞從外周血中分離出來。本產(chǎn)品為無菌、低內(nèi)毒素水平的即用型分離液，液密度為1.083 ± 0.001 g/mL（20℃）。嚙齒動物的淋巴細胞密度稍高于人淋巴細胞，且小鼠外周血分離易溶血。根據(jù)這些特性，本產(chǎn)品在傳統(tǒng)Ficoll-泛影葡胺基礎(chǔ)上進行了優(yōu)化，能夠在血液加入后較長的時間內(nèi)維持分離液的穩(wěn)定性，且使用操作簡單且分離的淋巴細胞純度高、狀態(tài)好。
儲存與運輸
冰袋(wet ice)運輸；2-8℃避光保存，有效期12個月。
操作步驟
以分離1 mL鼠類外周血淋巴細胞分離為例，血液和淋巴細胞分離液體積比為1:1-1:2，在此范圍內(nèi)適當(dāng)調(diào)整；選擇離心管時需注意，血液和淋巴細胞分離液總體積不超過離心管容積的三分之二。
1. 取新鮮抗凝全血（肝素、EDTA、枸櫞酸鈉等抗凝劑皆可）1 mL，加入等體積PBS或者無鈣鎂Hanks緩沖液稀釋，即得到2 mL稀釋的全血；
2. 吸取大小鼠外周血淋巴細胞分離液3 mL加入到15 mL無菌離心管中；
3. 將離心管傾斜45°，將2 mL稀釋后的血液沿管壁緩慢加入到離心管中，使血液平鋪在大小鼠外周血淋巴細胞分離液上層；
4. 建議使用水平轉(zhuǎn)頭離心機離心，將離心管置于水平轉(zhuǎn)頭適配器中，降低離心機加減速（3-5檔為宜），室溫條件下800 g離心25 min；
5. 離心后，輕拿離心管置于管架上，可觀察到明顯的分層現(xiàn)象：最上層是血漿層；中上白膜層是淋巴細胞層；中下層為淋巴細胞分離液層；最下層為紅細胞和粒細胞層（參考附圖）；
6. 吸除最上層血漿層，小心吸取白膜層（淋巴細胞層）到另外一個潔凈的無菌離心管；
7. 用8 mL PBS或其他緩沖液洗滌后，100 g離心10 min，棄上清；
8. 重復(fù)步驟7（可選）
9. 根據(jù)實驗?zāi)康挠盟枧囵B(yǎng)基或緩沖液重懸淋巴細胞。
注意事項
1. 本產(chǎn)品在使用前需室溫充分平衡并顛倒混勻，分離時溫度以18-25℃為宜。
2. 為保持淋巴細胞的活性，血液最好選取采血2 h以內(nèi)的新鮮抗凝血液；如需對分離的淋巴細胞進行進一步的培養(yǎng)和檢測，請在采血和分離的過程中注意無菌操作。
3. 稀釋或洗滌緩沖液，不可使用含鈣、鎂離子的緩沖液，以免導(dǎo)致血細胞凝聚。
4. 過多的吸取白膜層以外的成分，會導(dǎo)致交界處的一些粒細胞或血小板等被混入。
5. 由于不同血液樣本間的差異，可能對分離效果產(chǎn)生影響。客戶可根據(jù)實際情況適當(dāng)調(diào)整離心力和時間，參考離心力和時間范圍為：500-1000 g、20-30 min。
6. 將血液和淋巴細胞分離液混合一定時間后，出現(xiàn)紅細胞沉降屬于正常現(xiàn)象。
7. 為了您的健康和安全，操作時請穿好實驗服、戴好手套。
附圖：分離前后，各層示意圖
本產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
凡合肥萬物生物科技有限公司銷售的產(chǎn)品均有嚴格的質(zhì)量保證。如發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品存在包裝規(guī)格疑問，請于收貨之日起七日內(nèi)向我公司總部或當(dāng)?shù)剞k事處提出，并請保證該產(chǎn)品，以備本公司進行核對檢驗。如果發(fā)現(xiàn)有質(zhì)量問題，請于收貨后一月內(nèi)保留產(chǎn)品50%以上的量，以便本公司回收產(chǎn)品進行質(zhì)檢，確認產(chǎn)品質(zhì)量。如逾期，則視為已經(jīng)對本公司產(chǎn)品進行驗收。 聲明：如發(fā)生產(chǎn)品索賠事宜，本公司僅在產(chǎn)品價格范圍內(nèi)酌情賠償，恕不接受超出產(chǎn)品價格范圍之賠償。客戶在使用過程中有任何技術(shù)問題可以撥打技術(shù)售后服務(wù)電話我們隨時給予解答。
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