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萬物生物 - 慢病毒包裝

來源:萬物   發(fā)布時(shí)間:2021-08-31

慢病毒(Lentivirus)是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種,它需要相對(duì)較長(zhǎng)的孵育時(shí)間,所以稱之為“慢”病毒,Lenti在拉丁文中就是慢的意思。它包括人免疫缺陷病毒(HIV)、貓免疫缺陷病毒(FIV)、猿免疫缺陷病毒(SIV)、牛免疫缺陷病毒等。其中研究最多的是HIV-1慢病毒。  

慢病毒載體(Lentivirus vector)是以慢病毒基因組為基礎(chǔ),由所需的目的基因取代部分基因構(gòu)建而成。目前使用的慢病毒載體多采用HIV-1基因組改造而來。與一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體相比,慢病毒載體對(duì)分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力而具有更廣的宿主范圍。慢病毒載體還可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而實(shí)現(xiàn)持久表達(dá)。在感染能力方面可以有效感染神經(jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞,又很少引發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng),能達(dá)到良好的基因治療效果,具有廣闊的應(yīng)用前景。

慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)流程如下:

1.根據(jù)目的基因相關(guān)信息(序列,基因序列號(hào)等)獲取目的基因;

2.根據(jù)客戶要求選擇對(duì)應(yīng)載體;

3. 將目的基因構(gòu)建到慢病毒載體獲得含有目的基因的重組載體;

4. 測(cè)序鑒定重組質(zhì)粒,高純化(不含內(nèi)毒素)提取的重組質(zhì)粒;

5. 使用高純提重組載體和慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染 293FT 細(xì)胞,進(jìn)行病毒包裝并收集上清液;

6. 通過超濾和超速離心濃縮和純化病毒;

7. 使用病毒液感染 293T 細(xì)胞,藥物篩選細(xì)胞,構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。

慢病毒使用安全及注意事項(xiàng)

1.慢病毒相關(guān)實(shí)驗(yàn)請(qǐng)?jiān)谏锇踩駜?nèi)操作。如果使用超凈臺(tái)請(qǐng)不要打開風(fēng)機(jī)。

2.慢病毒感染實(shí)驗(yàn)時(shí),請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服,佩戴口罩和手套,盡量不用將身體的任何部位裸露在安全柜內(nèi)。

3.操作病毒時(shí)盡量避免氣霧或者飛濺。如果濺出,請(qǐng)立即用70%乙醇加1%SDS溶液擦拭干凈。

4.如果需要離心,應(yīng)使用密封性好的離心管,或者用Parafilm膜封口后離心。

5.廢棄的含有病毒的培養(yǎng)基或者病毒接觸過的槍頭、離心管、培養(yǎng)板及培養(yǎng)瓶請(qǐng)用84消毒液(1:20),浸泡一天后丟棄。

6.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后請(qǐng)用肥皂清洗雙手。

 


                               第二代慢病毒質(zhì)粒                                                                                         第三代慢病毒質(zhì)粒



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